藥品微生物檢驗(yàn)常見問題問答集錦（二）
發(fā)布時(shí)間：2020-05-28
問：無菌檢查法中，為什么培養(yǎng)基靈敏度檢查用了銅綠假單胞菌，而方法適用性以大腸埃希菌為驗(yàn)證菌株？
答：我國是抗生素及注射劑生產(chǎn)使用大國，銅綠假單胞菌為假單胞菌屬菌種，對很多抗生素都天然耐藥，藥物敏感度不高，不適合做方法適用性。但假單胞菌屬的細(xì)菌對培養(yǎng)體系的營養(yǎng)要求高，所以適合做培養(yǎng)基適用性檢查。
問：什么是不可接受微生物？
答：不可接受微生物通常是指那些已知有明顯致病性的，存在足夠的數(shù)量，通過產(chǎn)品的給藥途徑可能導(dǎo)致患者不可接受風(fēng)險(xiǎn)的微生物。如何確定一種微生物是不可接受的，需要進(jìn)行風(fēng)險(xiǎn)分析，包括微生物負(fù)載量、微生物特性、產(chǎn)品特性、給藥途徑、對患者潛在影響等。
問： 培養(yǎng)基滅菌沒有按照廠家提供的滅菌參數(shù)進(jìn)行，是否可行？
答：可以。廠家產(chǎn)品說明書提供的滅菌參數(shù)可作為參考使用，使用單位也可以根據(jù)自己實(shí)驗(yàn)室的實(shí)際情況，在相關(guān)法規(guī)要求內(nèi)，使用自己驗(yàn)證過的滅菌參數(shù)來執(zhí)行。
【法規(guī)來源：中國藥典2015版9203藥品微生物實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理指導(dǎo)原則 ……培養(yǎng)基滅菌應(yīng)按照生產(chǎn)商提供或使用者驗(yàn)證的參數(shù)進(jìn)行……】
問：草酸鉀兔血漿和兔血漿的用途分別是什么？
答：草酸鉀兔血漿用于溶血性鏈球菌鏈激酶試驗(yàn)，致病性乙型溶血性鏈球菌能產(chǎn)生鏈激酶(即溶纖維蛋白酶)，此酶能激活正常人體血液中的血漿蛋白酶原，使生成血漿蛋白酶，而后溶解纖維蛋白。此實(shí)驗(yàn)乙型溶血性鏈球菌陽性，金黃色葡萄球菌陰性。
兔血漿用于金黃色葡萄球菌的血漿凝固酶試驗(yàn)。細(xì)菌生成血漿凝固酶后釋放于血漿中，稱為游離凝固酶，不直接作用到血漿纖維蛋白原上，而是被血漿中的致活劑（即凝固酶致活因子）激活后變成耐熱的凝固酶樣物質(zhì)，此物質(zhì)纖維蛋白原變?yōu)楣虘B(tài)纖維蛋白，血漿因而凝固。致病性葡萄球菌能產(chǎn)生凝固酶，例金黃色葡萄球菌陽性，表皮葡萄球菌陰性。
問：革蘭氏染色有哪些注意事項(xiàng)？
答：（1）最好挑選18-24h的菌落進(jìn)行革蘭氏染色,培養(yǎng)時(shí)間過久的的革蘭氏陽性細(xì)菌可能會被染成紅色而造成假陰性。
（2）挑取適量的菌，不宜過多,均勻涂開。
（3）乙醇脫色是革蘭氏染色是否成功的關(guān)鍵,15-30s為宜，脫色不夠可能會造成假陽性,脫色過度可能會造成假陰性。
問：如何根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要制備斜面？
答：根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求，擺放斜面一般有三種形式：
（1）長斜面：斜面底部剛覆蓋試管底部，上部距管口2.5-3cm左右；例如TSA傳代斜面。
（2）高層斜面：斜面與底層高度約為2:3，即底部高約3cm，斜面長度約2cm；如三糖鐵高層斜面。
（3）普通斜面：斜面底部距試管底部約1cm，上部距管口約2.5-3cm。
問：三糖鐵培養(yǎng)基顏色變化原理是什么？
答：該培養(yǎng)基含有乳糖、蔗糖和葡萄糖的比例為10:10:1，只能利用葡萄糖的細(xì)菌，分解葡萄糖產(chǎn)酸可使斜面先變黃，但因量少，生成的少量酸接觸空氣而氧化，加之細(xì)菌利用培養(yǎng)基中含氮物質(zhì)，生成堿性產(chǎn)物，故使斜面后來又變紅，底部由于是在厭氧狀態(tài)下，酸類不被氧化，所以仍保持黃色。而發(fā)酵乳糖的細(xì)菌則產(chǎn)生大量的酸，使整個(gè)培養(yǎng)基呈現(xiàn)黃色。如菌種接至培養(yǎng)基培養(yǎng)后產(chǎn)生黑色沉淀，是因?yàn)槟承┘?xì)菌能分解含硫氨基酸，生成硫化氫，硫化氫和培養(yǎng)基中的鐵鹽反應(yīng)，生成黑色的硫化亞鐵沉淀。
問：如果三糖鐵上斜面紅色、底層黃色，中間有黑色且產(chǎn)氣，能否判定為沙門菌？
答：不能。某些非沙門菌也能在三糖鐵上呈現(xiàn)和沙門菌一樣的顏色變化，例如奇異變形桿菌。如三糖鐵上有上述顏色變化，需要進(jìn)一步的進(jìn)行適宜的鑒定試驗(yàn)，確證是否為沙門菌。
如果采用傳統(tǒng)的生化鑒定，可參考GB 4789.4-2016中沙門氏菌檢驗(yàn)的方法。
問： 按照中國藥典2015版1106控制菌檢查法檢測大腸埃希氏菌，如果麥康凱瓊脂上有疑似菌，如何用傳統(tǒng)方法確證？
答：挑選疑似菌分離、純化。
（1）革蘭氏染色：革蘭氏陰性無芽孢桿菌；
（2）乳糖發(fā)酵試驗(yàn)：產(chǎn)酸產(chǎn)氣或產(chǎn)酸不產(chǎn)氣；
（3）IMVIC試驗(yàn)結(jié)果：++--或-+--；
判定檢出大腸埃希氏菌。
問： 按照中國藥典2015版1106控制菌檢查法檢測銅綠假單胞菌時(shí)，溴化十六烷基三甲銨瓊脂培養(yǎng)基中加入甘油的作用是什么？
答：作為碳源補(bǔ)充，有利于綠膿菌素的生成。
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