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藥品微生物檢驗常見問題問答集錦（一）

發(fā)布時間：2020-05-28

問：沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基（SDA）上會不會生長細菌？
答：SDA不是選擇性培養(yǎng)基，而是一種廣譜的增菌培養(yǎng)基，pH范圍5.4-5.8，某些細菌是可以在SDA上生長的，霉菌和酵母菌總數(shù)計數(shù)時SDA上生長的菌均應(yīng)計入霉菌和酵母菌總數(shù)；或者可以經(jīng)過評估選擇含有抗生素（如氯霉素）的SDA或者玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基進行霉菌和酵母菌總數(shù)計數(shù)。

問：沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基（SDA）上會不會生長細菌？
答：SDA不是選擇性培養(yǎng)基，而是一種廣譜的增菌培養(yǎng)基，pH范圍5.4-5.8，某些細菌是可以在SDA上生長的，霉菌和酵母菌總數(shù)計數(shù)時SDA上生長的菌均應(yīng)計入霉菌和酵母菌總數(shù)；或者可以經(jīng)過評估選擇含有抗生素（如氯霉素）的SDA或者玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基進行霉菌和酵母菌總數(shù)計數(shù)。

問：中國藥典2015版要求霉菌和酵母菌平皿計數(shù)時培養(yǎng)5-7天，那么培養(yǎng)5天可以么？
答：微生物限度檢查中霉菌和酵母菌培養(yǎng)時間5-7天，因不同的霉菌酵母菌生長特性不同，所以具體培養(yǎng)時間，由企業(yè)根據(jù)各自情況（基于風(fēng)險評估）自行確定。

問：中國藥典2015版要求霉菌和酵母菌平皿計數(shù)時培養(yǎng)5-7天，該如何計數(shù)？
答：但是在實際操作中，我們會發(fā)現(xiàn)如果樣品中存在霉菌，培養(yǎng)到第5-7天時，可能菌落之間已經(jīng)融合，并蔓延生長至整個平皿，此時的霉菌已經(jīng)無法計數(shù)。建議霉菌和酵母菌檢測時，第三天計一次數(shù)，培養(yǎng)結(jié)束時計一次數(shù)，比較兩組數(shù)據(jù)，以多者為最終結(jié)果。霉菌和酵母菌檢測培養(yǎng)過程中，避免頻繁取拿觀察，盡量避免振動等，防止孢子擴散。

問：藥企的環(huán)境檢測應(yīng)該依據(jù)那個標(biāo)準(zhǔn)？
答：關(guān)于環(huán)境檢測，2015版《中國藥典》的9205和GB/T16294-2010《醫(yī)藥工業(yè)潔凈室(區(qū))懸浮粒子、浮游菌和沉降菌的測試方法》都有規(guī)定，且一些細節(jié)略有差別。其中國標(biāo)的規(guī)定更為具體，建議實際操作中以國標(biāo)為準(zhǔn)，藥典可以做為參考。

問：一些不常用的培養(yǎng)基開瓶后在效期內(nèi)較長時間沒有用完，那么這些開瓶后的培養(yǎng)基需要進行復(fù)驗嗎？
答：開瓶后的培養(yǎng)基，如果長時間不使用，還在效期內(nèi)，建議開瓶后間隔1年進行復(fù)驗。如果出現(xiàn)結(jié)塊，則不能使用。同理，如果同一批次一次購買量較多，一年內(nèi)未使用完，也建議進行復(fù)檢。

問：薄膜過濾法，濾膜邊緣長了一圈菌，原因有哪些？
答：出現(xiàn)這個現(xiàn)象，可能的原因（常見）包括以下三個方面：
（1）濾杯：無論是一次性的濾杯還是反復(fù)滅菌的濾杯，理論上都是無菌的，但是不排除濾杯滅菌不徹底和使用時操作人員與濾杯底部接觸，污染濾杯的可能。
（2）微限儀的濾頭：微限儀濾頭如果在更換濾膜的過程中滅菌不徹底，上一個樣品可能會污染下一批濾膜，如果微限儀長時間不滅菌，或使用的濾膜破損，都可能使微限儀內(nèi)部管道帶菌，在泵開啟的瞬間形成氣溶膠，污染濾頭。
（3）轉(zhuǎn)移過程中被污染：在濾膜由濾頭轉(zhuǎn)移至平皿的過程中，鑷子滅菌不徹底，操作者手不穩(wěn)使濾膜和儀器，臺面，平皿，身體發(fā)生過接觸。
具體問題具體分析，如果出現(xiàn)這樣的問題，需要根據(jù)實驗室的實際情況具體分析。

問：控制菌檢查法中用到的培養(yǎng)基，在做培養(yǎng)基適用性的時候，其中有“指示特性”的表述，那么“指示特性”是指的什么意思？
答：培養(yǎng)基指示特性包括菌落大小、形態(tài)特征、指示劑反應(yīng)情況（菌落顏色變化）等。例如大腸埃希氏菌在麥康凱瓊脂培養(yǎng)基上桃紅色菌落有沉淀環(huán)、乙型副傷寒沙門菌在XLD有黑心等。

問：無菌檢查法用到的培養(yǎng)基（FTM和TSB）進行培養(yǎng)基適用性檢查的時候需不需要使用對照培養(yǎng)基？
答：在2015版《中國藥典》無菌檢查法通則1101中，并沒有強制規(guī)定靈敏度檢查需要使用對照培養(yǎng)基，所以不使用對照培養(yǎng)基也是可以的。但是國家有FTM和TSB的對照培養(yǎng)基，建議在做FTM和TSB的培養(yǎng)基適用性時，使用對照培養(yǎng)基進行參比。

問：生孢梭菌如何計數(shù)？
答：（1）使用用硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基，在培養(yǎng)16-18小時這個時間進行觀察，計數(shù)，計數(shù)前不要搖晃，培養(yǎng)時間太長，培養(yǎng)基將渾濁，點計不清；（2）使用哥倫比亞瓊脂培養(yǎng)基，澆注或涂布后，置厭氧罐（袋）里，再置培養(yǎng)箱培養(yǎng)，計數(shù)。

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